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Delta-8 動物胃腸道體內(nèi)中藥物的溶解度的測定——材料和方法
來源：上海謂載 瀏覽 1559 次 發(fā)布時間:2021-11-26
材料和方法
材料
美沙拉秦（也稱為美沙拉秦或5-ASA，水溶性1.32 mg/ml，[11]log P 0.98[13]）來自Sigma-Aldrich（英國多塞特），潑尼松龍（log P 1.59[14]）來自塞文生物技術(shù)有限公司（英國伍斯特郡）。水、甲醇、不含過氧化氫的四氫呋喃和三氟乙酸從Fisher Scientific（英國拉夫伯勒）購買，為HPLC級。緩沖容量測定用NaOH和HCl的容量標(biāo)準(zhǔn)從Sigma-Aldrich處獲得。
胃腸組織
所有程序均由內(nèi)政部批準(zhǔn)（PPL編號70/6421），并根據(jù)英國1986年《動物（科學(xué)程序）法》進行。豬的胃腸道是在切勒肉類有限公司（英國埃塞克斯）的屠宰場從新鮮殺死的雄性動物（大白種和長白種雜交，n=3,95–110千克，6個月）獲得的。成年新西蘭大白兔（n=6,2.1-2.3 kg，9-10周）和Wistar大鼠（n=8220-255 g，8周）購自英國哈蘭有限公司（英國牛津郡）。所有動物都可以自由飲水，并在處死前自由進食：兔子，實驗室飲食5322，添加維生素C（英國諾丁漢郡IPS）；豬，Eltabreed Bingle母豬蛋糕-豬用復(fù)合飼料（ABN有限公司，英國彼得伯勒）；大鼠，Teklad全球18%蛋白質(zhì)嚙齒動物飲食（哈蘭有限公司）。
胃腸液
所有測量均在從動物胃腸液中獲得的上清液上進行。處死動物，將胃腸道分為胃、小腸、盲腸和結(jié)腸。如前所述，進一步細(xì)分小腸和結(jié)腸。[6,12]將胃腸液轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦校缓笠?3200 rpm的轉(zhuǎn)速離心（德國漢堡Eppendorf AG 5415D離心機）(～16 110×g rcf）保存20分鐘。上清液在–80°C下保存，直至分析。由于大鼠胃腸道的液體容量有限，根據(jù)解剖位置收集了8只大鼠的液體，包括胃、小腸（近端、中部和遠端）、盲腸和結(jié)腸。這些液體的緩沖容量、滲透壓和表面張力的特征如下所述。還測定了藥物在這些液體中的溶解度。所有測量均以一式三份進行。由于來自大鼠的液體的匯集性質(zhì)，所述標(biāo)準(zhǔn)偏差代表分析變異性；然而，對于兔子和豬來說，它代表了動物間的變異性。
滲透壓
使用數(shù)字微滲透計（5R型）（德國柏林Hermann Roebling Messtechnik）測定胃腸液上清液的滲透壓，其中滲透壓是利用冰點降低理論測量的。每次測量使用100μl的體積。
表面張力
使用Delta-8管理軟件（版本3.8）控制的Delta 8張力計（芬蘭埃斯波Kibron公司）測量表面張力。使用DynePlates（為張力計設(shè)計的96孔板）進行測量，每個孔中有50μl上清液。
pH值和緩沖容量
使用配有FC202電極的pH計（HI99161）測量GI上清液的pH值和緩沖容量，該電極用于測量粘性和半固體材料（Hannah Instruments，Bedfordshire，UK）。在pH值變化為0.5和1.0單位時，通過向胃腸液中的300μl上清液樣品中添加小份HCl（用于腸液）或NaOH（用于胃液）來測量緩沖液容量，以達到所需的pH值變化。然后使用以下方程式計算緩沖容量：
式中，Ma是酸的摩爾濃度，Va是酸的體積（單位：毫升），Vb是緩沖液的體積（單位：毫升），ΔpH是pH單位的變化。
溶解度研究
樣品處理和溶解度測量
過量的毒品(～20毫克強的松龍或～將15mg美沙拉秦）添加到含有200μl胃腸液上清液的微離心管（Eppendorf AG）中。然后將樣品置于振蕩?。ㄓ虿占觽惪财眨┲?，溫度保持在37°C，轉(zhuǎn)速為170 rpm。24小時后，以5000 rpm的轉(zhuǎn)速離心樣品(～4472×g rcf）在37°C下放置10分鐘（離心機5804R，Eppendorf AG）。將上清液依次轉(zhuǎn)移至離心過濾管（康寧Spin-X，0.22μm醋酸纖維素膜，從英國萊斯特郡費希爾科學(xué)公司獲得），然后以5000 rpm離心(～4472×g rcf）在37°C下放置20分鐘（離心機5804R，Eppendorf AG）。在分析之前，取下等份濾液（50μl）并用1950μl流動相稀釋。該方法之前已經(jīng)過驗證[11]，以避免藥物在生物液體中降解或與過濾器結(jié)合而影響溶解度結(jié)果。
分析方法
使用先前報告的方法，通過配備紫外線檢測器（安捷倫科技1200系列，加利福尼亞州圣克拉拉）的反相高效液相色譜法測定樣品中溶解的潑尼松龍或美沙拉秦的量。[11]空白胃腸液樣品（來自“樣品處理和溶解度測量”部分的無藥物上清液）也以與測試溶解度的樣品相同的方式分析，以排除在藥物保留時間出現(xiàn)干擾峰的可能性?？瞻讟悠芬耘c樣品相同的方式稀釋，過濾并隨后分析。色譜條件為：流動相（5%甲醇，95%水加0.05%三氟乙酸用于美沙拉秦，68.8%水，25%四氫呋喃和6.2%甲醇用于潑尼松龍）；反相柱，水對稱性C8 5μm 4.6×250mm（美國馬薩諸塞州米爾福德沃特斯）用于潑尼松龍，5μm 250×4mm（德國達姆施塔特默克）用于美沙拉秦。美沙拉秦和潑尼松龍分別在228nm和254 nm處檢測，保留時間分別為7.0和9.9分鐘。兩種藥物的剩余分析條件相同（即：20μl注射量，124 bar和40°C柱溫下的流速為1 ml/min）。
統(tǒng)計分析
總體數(shù)據(jù)通過單向方差分析進行分析，然后使用IBM SPSS Statistics 19（美國伊利諾伊州芝加哥SPSS Inc.）進行Tukey事后分析，置信區(qū)間為95%。使用一元一般線性模型工具，結(jié)合Tukey事后分析，將物種和位置作為固定因素，事后結(jié)果的統(tǒng)計顯著性為P<0.05。
Delta-8 動物胃腸道體內(nèi)中藥物的溶解度的測定——摘要、介紹
Delta-8 動物胃腸道體內(nèi)中藥物的溶解度的測定——材料和方法